Hafizhah Husna

Laporan Mikrobiologi Pangan tentang Pengaruh Faktor Instrinsik Terhadap Pertumbuhan Mikroba

21.35 |

LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI PANGAN

Judul Praktikum : Pengaruh Faktor Instrinsik Terhadap Pertumbuhan MIkroba

Praktek ke/Gol : VI (Enam)/ III (Tiga)

Hari / Tanggal : Senin / 15 September 2014

Tujuan Praktikum :Mahasiswa mengetahui faktor instrinsik apa saja yang mempengarugi pertumbuhan mikroba

Tinjauan Pustaka :

Faktor intrinsik adalah faktor-faktor yang terdapat pada bahan pangan yang dapat mempengaruhi pertumbuhan mikrobia, baik memacu maupun menghambat pertumbuhan mikrobia pada bahan pangan tersebut. Faktor-faktor yang mempengaruhi pertumbuhan jasad renik yang bersifat heterotrof adalah tersedianya nutrient, tersedianya air, suhu, pH, tersedianya oksigen, adanya zat penghambat,waktu dan lainnya.

J nutrient

Jasad renik heterotrof membutuhkan nutrient untuk kehidupan dan pertumbuhannyayaitu sebagai : sumber karbon, sumber nitrogen, sumber energi, dan faktor pertumbuhan yaitu mineral dan vitamin. Nutrient tersebut dibutuhkan untuk membentuk energi dan menuyusun komponen-komponen sel. Setiap jasad renik bervariasi dalam kebutuhannya akan zat-zat nutrisi tersebut.

Jasad renik yang tumbuh pada makanan umumnya bersifat heterotrof yaitu yang menggunakan karbohidrat sebagai sumber energi dan karbon, walaupun komponen organik lainnya yang mengandung karbon mungkin juga bisa di gunakan. Kebanyakan organisme heterotrof menggunakan komponen organik yang mengandung nitrogen sebagai sumber N, tetapi beberapa dpat pula menggunakan sumber nitrogen anorganik.

J aktifitas air

Mikroorganisme memerlukan air untuk hidup dan berkembang biak, oleh karena itu pertumbuhan sel mikroorganisme di dalam suatu makanan sangat dipengaruhi oleh jumlah air. Air merupakan bagian terbesar dari komponen sel (70 -80 %), air juga dibutuhkan sebagaii reaktan dalam berbagai reaksi biokimia. Tidak semua air yang terdapat dalam bahan pangan dapat digunakan oleh mikroorganisme.

J suhu

Suhu adalah salah satu faktor lingkungan terpenting yang mempengaruhi kehidupan dan pertumbuhan organisme. Suhu optimum selalu lebih mendekati maksimum daripada minimum berlandaskan hubungan antara suhu tersebut di atasm mikroorganisme dapat digolongkan menjadi kelompok psikrofil, psikotrof, mesofil dan thermofil.

J pH

Nilai pH medium sangat mempengaruhi jenis jasad renik yang dapat tumbuh. Jasad renik pada umumnya dapat tumbuh pada kisaran pH 3-6 unit. Kebanyakan bakteri mepunyai pH optimum, yaitu pH dimana pertumbuhan masimum, sekitar pH 6,5-7,5. Pada pH di bawah 5,0 dan diatas 8,5 bakteri tidak dapat tumbuh dengan baik, kecuali bakteri asam asetat dan bakteri oksidasi sulfur. Sebaliknya, khamir menyukai pH 4-5 dan dapat tumbuh pada kisaran pH 2,5-8,5. Oleh karena itu khamir tumbuh pada pH rendah dimana pertumbuhan bakteri terhambat. Kapang mempunyai pH optimum 5-7, tetapi seperti halnya khamir, kapang masih dapat hidup pada pH 3-8,5.

Penggolongan makanan berdasarkan pHnya adalah sebagai berikut :

- Makanan berasam rendah, yaitu makanan yang mempunyai pH diatas 5,3 misalnya jagung, daging,ikan dan susu.

- Makanan berasam sedang, yaitu makanan yang mempunyai pH 5,3 sampai 4,5. Misalnya bayam, asparagus, bit, dan waluh kuning.

- Makanan asam, yaitu makanan yang mempunyai pH 4,5 sampai diatas 3,7. Misalnya tomat, pear, dan nenas.

- Makanan berasam tinggi, yaitu makanan yang mempunyai pH 3,7 atau kurang. Misalnya buah-buahan yang tergolong asam dan acar-acaran.

J Tersedianya Oksigen

Tidak seperti bentuk kehidupan lainnya, mikroorganisme berbeda nyata dalam kebutuhan oksigen guna metabolismenya. Beberapa kelompok dapat dibedakan sebagai :

Organisme aerobik : dimana tersedianya oksigen dan penggunaannya dibutuhkan untuk pertumbuhan.
Organisme anaerobik : tidak dapat tumbuh dengan adanya oksegen dan bahkan oksigen ini dapat merupakan racun bagi organisme tersebut.
Organisme anaerob fakultatif : Dimana oksigen akan dipergunakan apabila tersedia, kalau tidak tersedia, organisme tetap dapat tumbuh dalam keadaan anaerobik.
Organisme mikroerofilik ( microaerophilic organisms) : yaitu mikroorganisme yang lebih dapat tumbuh pada kadar oksigen yang lebih rendah daripada kadar oksigen dalam atmosfer.

J Zat antimikroba

Makanan mungkin mengandung komponen yang dapat menghambat pertumbuhan jasad renik. Komponen anti mikroba tersebut terdapat di dalam makanan melalui salah satu dari beberapa cara yaitu :

- Terdapat secara alamiah di dalam bahan pangan.

- Di tambahkan dengan sengaja ke dalam makanan

- Terbentuk selama pengolahan atau ole jasad renik yang tumbuh selaa fermentasi makanan.

J Waktu

Bila suatu sel mikroorganisme diinokulasi pada media nutrien segar, pertumbuhan yang terlihat mula-mula adalah suatu pembesaran ukuran volume dan berat sel. Ketika ukurannya telah mencapai kira-kira dua kali dari besar sel normal, sel tersebut membelah dan menghasilkan dua sel . Sel-sel tersebut tumbuh dan membelah diri menghasilkan empat sel. Selama kondisi memungkinkan pertumbuhan dan pembelahan sel berlangsung terus sampai sejumlah besar populasi sel terbentuk . Jika pembelahan sel dan sel terbentuk maka sejumlah besar sel dapat terbentuk dalam waktu yang sangat singkat.

Waktu antara masing-masing pembelahan sel berbeda-beda tergantung dari spesies dan kondisi lingkungannya, tetapi untuk kebanyakan bakteri waktu ini berkisar antara 10-60 menit. Tipe pertumbuhan yang cepat ini disibut pertumbuhan logaritmis atau eksponensial karena bila log jumlah sel digambarkan terhadap waktu dalam grafik akan menunjukkan garis lurus . Tetapi pada kenyataannya tipe pertumbuhan eksponensial ini tidak langsung terjadi pada saat sel dipindahkan ke media nutrien segar dan tidak terjadi secara terus menerus. Biasanya hal ini hanya terjadi dalam satu fase yang singkat dari pertumbuhan populasi mikroorganisme .

J Radiasi.

Sinar ultra violet dengan panjang gelombang tertentu dan radiasi ionisasi seperti sinar X dan sinar gamma dapat mudah terserap oleh sel mikroorganisme . Sinar-sinar tesebut dapat mengganggu metabolisme sel dan umumnya dapat cepat mematikan.

Faktor intrinsik (Sifat bahan pangan ) atau faktor dalam yang mempengaruhi populasi jasad renik (Mikro organisme) di dalam makanan meliputi sifat-sifat kimia atau komposisi, sifat fisik dan struktur makanan, misalnya nilai a_w (aktifitas air), komposisi nutrien, pH, potensi redoks, adanya bahan pengawet alami atau tambahan dsb.

Contoh : Mikro Organiseme pada daging berbeda dengan Mikroorganisme pada buah-buahan dan sayuran Karena kedua kelompok bahan pangan ini mempunyai komposisi, pH, potensi redoks dan sifat-sifat yang berbeda, bahkan pada daging Mikroorganisme bagian luar bersifat aerobik dan bagian dalam anaerob atau anaerob fakultatif.

Uji Koloni Mikroba

Metode yang dapat digunakan untuk menghitung jumlah koloni mikroba di dalam bahan pangan terdiri dari metoda hitungan cawan, Most Propable Number (MPN) dan metode mikroskopik langsung. Dari ketiga metode tersebut metode hitungan cawan paling banyak digunakan.

Metode Hitungan Cawan

Metode hitungan cawan merupakan metode yang paling sensitif untuk menentukan jasad renik, dengan prinsip jika sel jasad renik yang masih hidup ditumbuhkan pada medium agar maka sel jasad renik tersebut akan berkembang biak dan membentuk koloni yang dapat dilihat langsung dan dihitung tanpa menggunakan mikroskop (Fardiaz, 1992). Keuntungan menggunakan metode hitungan cawan dalam menghitung jumlah koloni pada medium agar adalah sebagai berikut:

1. Hanya sel yang masih hidup yang dihitung

2. beberapa jenis jasad renik dapat dihitung secara langsung

3. dapat digunakan untuk isolasi dan identifikasi jasad renik karena koloni yang terbentuk mungkin berasal dari suatu jasad renik yang mempunyai penampakan pertumbuhan spesifik.

Selain keuntungan yang dimiliki seperti tersebut di atas, metode hitungan cawan juga memiliki kelemahan seperti yang termuat dalam Fardiaz (1992), yaitu:

1. Hasil perhitungan tidak menunjukkan jumlah sel yang sebenarnya karena beberapa sel yang berdekatan mungkin membentuk satu koloni

2. medium dan kondisi inkubasi yang berbeda mungkin menghasilkan nilai yang berbed

3. jasad renik yang ditumbuhkan harus dapat tumbuh pada medium padat dan membentuk koloni yang nampak dan jelas, tidak menyebar.

4. memerlukan persiapan dan waktu inkubasi relatif lama sehingga pertumbuhan koloni dapat dihitung.

Metode hitungan cawan dapat dibedakan dalam dua cara yaitu metode tuang (pour plate) dan metode permukaan (surface plate) (Fardiaz, 1993).

1. Metode Tuang (Pour Plate)

Dari pengenceran yang dikehendaki, sebanyak 1 ml atau 0,1 ml larutan tersebut dipipet ke dalam cawan petri menggunakan pipet 1 ml atau 1,1 ml. Sebaiknya waktu antara dimulainya pengenceran sampai menuangkan ke dalam cawan petri tidak boleh lebih lama dari 30 menit. Kemudian ke dalam cawan tersebut dimasukkan agar cair steril yang telah didinginkan sampai 47-50⁰C sebanyak 15-20 ml. Selama penuangan medium, tutup cawan jangan dibiarkan dibuka terlalu lebar untuk menghindari kontaminasi dari luar. Segera setelah penuangan cawan petri digerakkan di atas meja secara hati-hati, untuk menyebarkan sel-sel secara merata, yaitu dengan gerakkan melingkar atau gerakan seperti angka delapan. Setelah agar memadat, cawan-cawan tersebut dapat diinkubasikan di dalam incubator dalam posisi terbalik (Fardiaz, 1993).

2. Metoda Permukaan (Surface/Spread Plate)

Pada pemupukan dengan metode permukaan, agar steril terlebih dahulu dituangkan ke dalam cawan petri dan biarkan membeku. Setelah membeku dengan sempurna, kemudian sebanyak 0,1 ml contoh yang telah diencerkan dipipet pada permukaan agar tersebut. Sebuah batang gelas melengkung (hockey stick) dicelupkan ke dalam alcohol 95% dan dipijarkan sehingga alcohol habis terbakar. Setelah dingin batang gelas tersebut digunakan untuk digunakan untuk meratakan contoh di atas medium agar dengan cara memutarkan cawan petri di atas meja. Selanjutnya inkubasi dan perhitungan koloni dilakukan seperti pada metode penuangan. Tetapi harus diingat bahwa jumlah contoh yang ditumbuhkan adalah 0,1 ml, jadi harus dimasukkan dalam perhitungan “total count” (Fardiaz, 1993).

Reagen/Bahan :

- NA

- PDA

Jenis	Bahan
Protein Hewani (Bakteri)	Ikan Mentah Daging Mentah Susu
Sayuran (Kapang & Khamir)	Tomat Segar Bayam Segar Wortel Segar
Buah (Kapang & Khamir)	Pepaya Sirsak Jambu Air
Karbohidrat	Kentang

Alat :

- Jarum Ose

- Kaca Preparat

- Caver The Glass

- Cawan Petri

- Laminar

- Inkubator

- Tabung reaksi

- Jarum Enten

- Oven

- Mikroskop

Prosedur :

1. Bagi bahan pada masing-masing golongan

2. Bahan yang di daatkan kemudian di biarkan diudara terbuka selama 2 jam

3. Amati mikroba apa yang terdapat di dalamnya dengan cara menghancurkan bahan tersebut dan dilihat jenisny di bawah mikroskop

4. Setelah diketahui jeni mikroba apa yang terdapat dalam bahan tersebut, kemudian diambil 1 loop bahan dan diinokulasikan diatas cawan agar (NA,PDA), kemudian inkubasi selama 1 jam

5. Hitung berapa pertumbuhan mikroba pada masing-masing cawan dan jenis bahan makanan

6. Buat laporan

Hasil Praktikum :

Hasil pengamatan pada sampel segar

No	Golongan	Bahan	Bentuk	Susunan	Sifat	Tersangka	Jenis
1	Gol. 1	Daging	Coccus	Tunggal	Gram (+)	Clostridium Perfingens	Bakteri
2	Gol. 2	Ikan	Coccus & diplococcus	Tunggal	Gram (+)		Bakteri
3	Gol. 3	Susu
4	Gol. 4	Bayam	Coccus	Berkoloni	Gram (+)	Aspergilus Flavus	Kapang
5	Gol. 5	Sirsak	Coccus	Tunggal	Gram (+)	Saccharomyces Cerevisiae	Khamir
6	Gol. 6	Jambu	Coccus	Tunggal	Gram (+)	Saccharomyces Cerevisiae	Khamir
7	Gol. 7	Tomat	Serabut	Berkoloni		Aspergilus Niger	Kapang
8	Gol. 8	Wortel	Cambuk	Berkoloni		Endomycopsis	Khamir
9	Gol. 9	Daging	Coccus	Tunggal	Gram (+)	Clostridium Perfingens	Bakteri
10	Gol. 10	Kentang	Coocus	Tunggal	Gram (+)	Debariomyces

Hasil pada sampel setelah 2 jam dibiarkan

No	Golongan	Bahan	Bentuk	Susunan	Sifat	Tersangka	Jenis
1	Gol. 1	Daging	Batang	Tunggal	Gram (-)
2	Gol. 2	Ikan	Batang	Tunggal	Gram (-)
3	Gol. 3	Susu	Batang	Berantai	Gram (-)	Streptobasil
4	Gol. 4	Bayam	Bulat (Coccus)	Berkoloni	Gram (+)	Aspergilus Flavus	Kapang
5	Gol. 5	Sirsak	Bulat (coccus)	Berkoloni	Gram (+)	Candida Utilis	Khamir
6	Gol. 6	Jambu	Bulat (coccus)	Berkoloni	Gram (+)	Candida Utilis	Khamir
7	Gol. 7	Tomat	Serabut	Berkoloni	Terbuka	Aspergilus Niger	Kapang
8	Gol. 8	Wortel	Cambuk	Koloni		Endomycopsis	Khamir
9	Gol. 9	Daging	Batang	Tunggal	Gram (-)
10	Gol. 10	Kentang	Cambuk	Tunggal		Endomycopsis	Khamir

Pembahasan :

Pada praktikum kali ini, kita mempraktekkan tentang faktor-faktor instrinsik yang mempengaruhi pertumbuhan mikroba. Sampel yang digunakan, yaitu: daging, jambu, tomat, sirsak, kentang, ikan, susu, bayam, dan wortel. Bahan bahan tersebut akan dilakukan pengamatan dibawah mikroskop dengan menggunkan isolasi dan pewarnaan gram. Praktikum kali ini, bahan tersebut dibagi jadi dua bagian, yang pertama bahan segar dan yang kedua bahan yang sudah dibiarkan selama 2 jam di udara terbuka. Selama bahan tersebut dibiarkan di udara terbuka, maka akan terjadi kontaminasi pada bahan tersebut. Sehingga, terdapat perbedaaan hasil pengamatan pada bahan yang segar dan bahan yang sudah dibiarkan selama 2 jam tersebut.

Kami dari golongan 3 mendapat sampel susu. Pada kelompok lain, mereka harus menghaluskan sampelnya terlebih dahulu agar memudahkan untuk melakukan isolasi dan pewarnaan gram. Tapi pada sampel susu tidak. Kami langsung melakukan pewarnaan gram pada sampel yang kami dapat. Setelah itu kami meletakkan kaca preparat tersebut di meja objek mikroskop untuk melihat ada atau tidaknya bakteri, kapang dan khamir. Setelah kami amati, ternyata pada sampel susu segar tidak ada terdapat bakteri. Hanya ada beberapa khamir dan kapang. Namun tidak begitu jelas terlihat. Kemudian kami membuka susu tersebut selama 2 jam di udara terbuka.

Setelah itu kami melakukan isolasi dengan bahan susu segar tersebut dengan NA sebagai medium pertumbuhannya. Kami simpan bahan ini ke dalam inkubator selama 1 jam. Setelah itu kami meneliti bahan susu yang sudah kami biarkan terbuka selama 2 jam. Terlihat di bawah mikroskop ada bakteri yang berbentuk basil berantai bewarna merah muda. Yang menunjukkan sifat dari bakteri tersebut gram negatif. Namun, bakteri ini juga tidak terlalu banyak. Mungkin bakteri ini terlihat kurang banyak di karenakan pH tempat penyimpanan sampel, dan tempat sampel dibuka di udara terbuka mungkin tidak mencapai pH yang bisa di tumbuhi oleh bakteri yag ada pada sampel.

Sampel yang ami biarkan pada udara terbuka selama 2 jam ini juga kami lakukan isolasi. Tetapi dengan media yang berbeda, yaitu dengan menggunakan PDA. Perlakuan pada kedua isolasi ini juga sama, dibungkus dengan kertas HVS dan disimpan di dalam inkubator. Hanya saja, sampel yang kedua ini di lihat dulu perubahan apa yang terjadi pada 1 jam pertama. Setelah 1 jam, kami tidak menemukan ada mikroba yang tumbuh secara kaset mata. Karena metode isolasi ini melihat secara makrokopis pertumbuhan mikroba. Setelah penyimpanan 1 jam pertama, isolasi ini dilanjutkan dengan penyimpanan selama 24 jam i dalam inkubator.

Setelah 4 jam inilah hasil mikroba yang di inkubator :

	Ini gambar hasil dari bahan segar yang diinokulasikan dengan media NA. Secara kaset mata terlihat bahwa banyak pertumbuhan mikrobanya.
	Ini gambar hasil inokulasi dari bahan yang dibiarkan terbuka selama 2 jam di udara terbuka. Dengan media PDA Yang mana secara kaset mata terlihat tidak ada pertumbuhan mikroba pada sampel. Karena cuma dilihat secara makroskopis.
	Ini adalah gambar di bawah mikroskop dengan sampel susu segar.

Kesimpulan :

Berdasarkan hasil praktikum ini dapat disimpulkan bahwa mikroba lebih banyak tumbuh dengan sampel segar dibandingkan dengan sampel yang sudah terkontaminasi selama 2 jam terbuka di udara terbuka.

Faktor instrinsik yang mempengaruhi pertumbuhan mikroba yaitu nutrient, tersedianya air, suhu, pH, tersedianya oksigen, adanya zat antimikroba,waktu, radiasi dan lainnya.

Daftar Pustaka :

Fardiaz,Srikandi. 1989. Mikrobiologi Pangan. Bogor: Pusat Antar Universitas Pangan dan Gizi IPB

http://gz208pdg.blogspot.com/2011/05/pertumbuhan-mikroba.html

http://srimutiar89.blogspot.com/2011/07/mikrobiologi-pangan.html

Padang, 20 September 2014

Yang membuat laporan,

(Hafizah Husna)

NIM 132210780

LAPORAN PRATIKUM MIKROBIOLOGI PANGAN

“Pengaruh Faktor Instrinsik Terhadap Pertumbuhan Mikroba”